Survival of vitrifi ed mouse blastocysts loaded into glass micro-capillaries

• Autores: Paula Rodríguez Villamil, Felipe Ongaratto, Daniela Scherer, Berenice de Ávila Rodrígues, José L. Rodrigues
• Localización: Revista Colombiana de Ciencias Pecuarias, ISSN-e 0120-0690, Vol. 23, Nº. 1, 2010, págs. 28-34
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Sobrevivência embrionária de blastocistos murinos vitrificados em micro capilares de vidro
  • Sobrevivencia embrionaria de blastocistos murinos vitrificados en microcapilares de vidrio
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• Resumen
  • español

    El objetivo de este estudio fue determinar las tazas de expansion y eclosion in vitro de los blastocistos murinos vitrificados en micro-capilares de vidrio (BrandR - 5 �ÊL). En el dia 4 de prenez, los blastocistos eran colectados de las donantes, evaluados morfologicamente y localizados en tres diferentes grupos:

    Grupo 1 (Control): compuesto por los embriones que eran transferidos a gotas de 100 �ÊL de medio KSOM y cultivados in vitro por un periodo de 72 h; Grupos 2 y 3: compuesto por los embriones que eran expuestos inicialmente a la solucion de equilibrio (PBSm + 10% EG + 10% PROH and 0.5% PVA) por 1 min, y posteriormente a la solucion de vitrificacion (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) por un periodo de 30 seg. Posteriormente, los blastocistos, eran almacenados dentro de micro-pipetas de vidrio (GMP) o micro-capilares de vidrio (GMC) y sumergidos en nitrogeno liquido (-200 ��C). La dilucion de los crioprotectores y desvitrificacion de los embriones fue realizada al colocarlos en gotas de 500 �ÊL de PBSm suplementado con 0.25 M de sacarosa a una temperatura de 37 ��C. Despues de 5 minutos los embriones fueron transferidos a gotas de 100 �ÊL de medio KSOM y cultivados in vitro por 72 h. Las tazas de expansion de los blastocistos, posteriores al cultivo fueron de 77% (138/177) y 74% (131/175), para los blastocistos vitrificados en GMP y GMC, respectivamente. Las tazas de eclosion fueron de 91% (134/146) para el grupo control, siendo mayores que para los embriones vitrificados en GMP 61% (108/177) y GMC 53% (93/175). El numero del indice de masa celular interna (ICM) para los embriones del grupo control fue de 25.7 �} 2.5 celulas, no teniendo diferencia significativa con el numero de celulas observado en los embriones vitrificados en GMP (24.2�}2.3) o GMC (22.5�}2.59). Ademas, las celulas del trofoectodermo, en el grupo control presentaron 63.1�}3.0 celulas, no siendo tampoco diferentes de las celulas de los embriones vitrificados en GMP (58.0�}1.8) o GMC (58.0�}.3.7). En conclusion, las GMC comerciales (BrandR) probadas en este estudio muestran la misma eficiencia que las GMP para la vitrificacion de embriones murinos.

  • português

    O objectivo de este estudo foi determinar as taxas de expansao e eclosao in vitro dos blastocitos murinos vitrificados em micro capilares de vidro (BrandR - 5 �ÊL). No quarto dia de prenhes, os blastocitos foram colectados das doadoras, avaliados morfologicamente e localizados em tres diferentes grupos: Grupo 1 (Controle): composto por os embrioes que foram transferidos a gotas de 100 �ÊL de KSOM e cultivados in vitro por um periodo de 72 h; Grupos 2 e 3: composto por os embrioes que foram expostos inicialmente a solucao de equilibrio (PBSm + 10% EG + 10% PROH e 0.5% PVA) por 1 min, e posteriormente a solucao de vitrificacao (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) por um periodo de 30 seg. Posteriormente, os blastocistos, foram armazenados dentro de micro pipetas de vidro (GMP) ou micro capilares de vidro (GMC) e submergidos em nitrogenio liquido super-resfriado (-200��C). A diluicao dos crioprotetores e desvitrificacao dos embrioes foi realizada ao colocar-lhos em gotas de 500 �ÊL de PBSm suplementado com 0.25 M de sacarose a uma temperatura de 37 ��C. Depois de 5 minutos, os embrioes foram transferidos a gotas de 100 �ÊL de KSOM e cultivados in vitro por 72 h. As taxas de expansao dos blastocistos, posteriores ao cultivo foram de 77% (138/177) e 74% (131/175), para os blastocistos vitrificados em GMP e GMC, respectivamente. As taxas de eclosao foram de 91% (134/146) para o grupo controle, e foram maiores os embrioes vitrificados em GMP 61% (108/177) e GMC 53% (93/175). O numero do indice de massa celular interna (ICM) para os embrioes do grupo controle foi de 25.7 �} 2.5 celulas, nao havendo diferencia significativa com o numero de celulas observado em embrioes vitrificados em GMP (24.2�}2.3) ou GMC (22.5�}2.59). Alem do mais, as celulas do trofoectodermo, no grupo controle apresentaram 63.1�}3.0 celulas, no sendo diferente as celulas dos embrioes vitrificados em GMP (58.0�}1.8) ou GMC (58.0�}.3.7).

    Em conclusao, as GMC comerciais (BrandR) provadas neste estudo indicam a mesma eficiencia que as GMP para a vitrificacao de embrioes murinos.

  • English

    The purpose of this study was to determine the in vitro expansion and hatching rates of vitrified mouse blastocysts loaded into glass micro-capillaries (Brand® - 5 ìL). Early morning on day 4 of pregnancy, blastocysts were collected from donors, morphologically evaluated, and then allocated in three groups:

    Group 1 (Control): embryos were transferred into 100 ìL of KSOM medium drops and in vitro cultured during 72 h; Groups 2 and 3: embryos initially exposed to the equilibration solution (PBSm + 10% EG + 10% PROH and 0.5% PVA) for 1 min, and then to vitrification solution (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) for 30 sec. After that, blastocysts were loaded into glass micropipettes (GMP) or glass microcapillaries (GMC) and plunged into super-cooled liquid nitrogen (-200 °C). Embryo warming and cryoprotectant dilution were carried out into 500 ìL droplets of PBSm supplemented with 0.25 M sucrose maintained at 37 °C. After 5 min embryos were transferred to 100 mL droplets of KSOM medium and cultured in vitro for 72 h. Blastocyst expansion rates after in vitro culture were 77% (138/177) and 74% (131/175), for blastocysts vitrified in GMP and GMC, respectively. Blastocyst hatching rate (control group) was 91% (134/146), which was higher than for embryos loaded in GMP 61% (108/177) and GMC 53% (93/175). ICM number in control group embryos contained 25.7 ± 2.5 cells and did not differ from the mean cell number observed in vitrified embryos loaded in GMP (24.2±2.3) or GMC (22.5±2.59). Regarding the trophoectoderm cell number, Group 1 embryos displayed 63.1±3.0 cells, and also not differ from the cell numbers of the embryos loaded into GMP (58.0±1.8) or GMC (58.0±.3.7). In conclusion, manufactured GMC (Brand®) tested in this study showed same efficiency as GMP for vitrification of mouse blastocysts.