Resumen de La cuantificación como herramienta de optimización del análisis de ADN mitocondrial en restos óseos antiguos

Christian Haarkötter Cardoso, Xiomara Gálvez Escolano, José Antonio Lorente Acosta, María Saiz Guinaldo, J.C. Álvarez

• español

  El análisis de ADN mitocondrial en restos óseos antiguos tiene multitud deaplicaciones como son la identificación humana, los estudios poblacionales, o laidentificación de especies no humanas, sumándose su interés al del análisis de restosóseos antiguos: desaparición de personas, víctimas de atentados terroristas,víctimas de grandes catástrofes, restos de fosas comunes en conflictos bélicos,litigios de filiación o las adopciones irregulares. No obstante, el análisis no estáexento de problemas técnicos que impiden la obtención de un resultado, como sonfundamentalmente la degradación del ADN, proceso natural tras la muerte que seve acentuado en muchas ocasiones por la acción de microorganismos, sustancias, ofactores como el pH o la temperatura; y la inhibición de la actividad de la reacciónen cadena de la polimerasa (PCR) motivada por sustancias que causan dichainhibición. El presente trabajo pretende mostrar la utilidad de la realización de unacuantificación del ADN mitocondrial inmediata a la extracción para, mediante PCR atiempo real, determinar la cantidad de ADN mitocondrial presente y el estado dedegradación del mismo, y así establecer la vía analítica más favorable para laobtención de un resultado. Para ello, se han degradado patrones de ADNmitocondrial con nucleasas en diluciones seriadas para posteriormente cuantificardos fragmentos, uno corto y uno largo, de dos regiones codificantes diferentes,obteniendo al mismo tiempo información sobre la cantidad y la calidad (en términosde degradación) del mismo.

• English

  Mitochondrial DNA analysis in skeletal remains has multiple applications like humanidentification, population studies, or non human species identification, adding itinterest to ancient skeletal remains analysis: missing people, terrorist attacksvictims, disaster victim identification, armed conflict potter’s field, filiation legalcases, or irregular adoptions. However, analysis is not exempt of technical problemswhich impede obtaining any result, we are talking about DNA degradation, a naturalprocess after organism death which is increased by the action of microorganisms, some substances or the action of factors like pH or temperature; and PCR inhibition,motivated by some substances. The present work aims to show the utility of therealization of a mitochondrial DNA quantification immediately after extraction inorder to, by real time PCR, determining the present mitochondrial DNA quantity andhow degraded it is, so we can choose the most favourable analytical step in order toget any result. To achieve that we have artificially degraded mitochondrial DNApatterns with DNAases in serial dilutions and then we quantified it in two fragments,one longer one shorter, from two different codding regions, obtaining informationabout mitochondrial DNA quantity and quality, in degradation terms.Key words: Ancient DNA. DNA Quantification. Forensic Genetics. MitochondrialDNA. Skeletal remains.